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液体菌种法栽培秀珍菇标准化生产技术
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摘要：安龙县位于25°N，是中国食用菌产业的黄金地带[1]。但安龙县食用菌企业食用菌母种和原种生产量较少，本地菌种制作技术落后、生产管理不规范，缺乏标准化、规模化生产技术规程，
安龙县位于25°N，是中国食用菌产业的黄金地带[1]。但安龙县食用菌企业食用菌母种和原种生产量较少，本地菌种制作技术落后、生产管理不规范，缺乏标准化、规模化生产技术规程，对食用菌的可持续发展造成了巨大阻碍。食用菌的品质和产量得不到保证，次品菇多、出菌率低且容易死亡，产业减收达30%左右，部分菇农甚至绝收[2]。采用纯度高、活力强、接种后发菌快、成本低的食用菌液体菌种法可增加生产厂房及设备周转率[3]。以贵州山环菌草科技有限公司为代表的高新技术食用菌公司，广泛引进及研发液体菌种技术及相关生产线，将液体菌种技术应用于平菇、香菇等大宗食用菌生产中，降本增效显著。
一、液体菌种生产工艺流程
三角瓶空消—种子瓶液体培养基质的制作—121℃高压蒸汽灭菌20 min—冷却至25℃—接种—摇床培养—发酵罐的清洗—发酵罐煮罐—发酵罐培养基质的制作—121℃高压蒸汽灭菌—冷却至25℃—接种—菌丝发酵培养—菌种质量检测—接种至料棒—发菌培养。
二、秀珍菇培养基配方
1、摇瓶培养基配方
1000 mL三角瓶：营养粉11%、葡萄糖1.5%、磷酸二氢钾2‰、硫酸镁1‰。
培养基灭菌条件：高压蒸汽灭菌，121℃，30 min。
2、发酵罐液体培养基质配方
800 L 液体发酵罐：营养粉0.7%、葡萄糖1%、红糖1%、消泡剂1‰。
3、检测培养基配方
250 mL 三角瓶：棉籽壳70%、麦麸28%、葡萄糖2%。
三、种子瓶液体菌种生产技术
三角瓶在使用前需彻底清洁，然后进行121℃高压蒸汽灭菌20 min 空消，消毒后转移到烘箱内烘干备用。1000 mL 三角瓶装液量上限为500 mL，装液量不宜过多，过多易导致污染。
依照种子瓶配方进行培养基质称量配制。应先称取营养粉，加入一半体积的RO 水，加热溶解，再加入其余的原料至溶解，稍微冷却后放入摇瓶中。将瓶口用纱布棉塞或砂芯硅胶胶塞密封瓶口，在外层用牛皮纸包扎进行二次封装后，将摇瓶正置放入高压灭菌锅中，121℃、压力为0.15MPa 下灭菌20 min。待培养基冷却至室温后，在超净工作台中，依照无菌操作规程进行接摇瓶种。采用0.5 mm 打孔器接入8-10 块秀珍菇母种菌块，接种结束后消毒瓶口，塞好棉塞或橡胶塞。然后放入摇床，设定温度25℃，转速120 rpm/min，培养6-7 天。
摇瓶静止时，菌球大小均匀，颗粒分明，菌球周边菌丝明显，培养液清澈。若摇瓶生长期间气味恶臭、培养液浑浊、菌球形态异常，则可能出现污染，需进一步采用显微镜镜检确定是否污染，再决定是否可以生产使用。
四、发酵罐液体菌种生产技术
1、发酵罐的清洗及检查
发酵罐在每次生产周期结束后及下个生产周期开始前，需对其进行无死角的清洗并进行空消及煮罐后才能投料使用。发酵罐清洗的主要目的是去除罐壁及死角的菌球、菌块、料液及其他可能造成继发污染的残留物。发酵罐的检查主要是保证接种阀和接种口放气阀通道通畅无异物、压力表和安全阀正常及罐口密封。
2、煮罐
为保证液体菌种品质，在制罐前一般要对发酵罐进行煮罐，特别是感染过杂菌的发酵罐。发酵罐罐体加水至视镜底线，约为罐体总容积的80%后，连接蒸汽发生器进行加热灭菌，打开罐顶气流控制阀，充分排出罐内上层的冷空气后，关闭所有的阀门让罐内温度和压力升高至100℃、0.05MPa 后，打开罐顶气流控制阀，进一步放空罐内冷空气，使灭菌更加彻底。关闭罐顶气流控制阀后，待罐内温度达到121℃、压力达到0.12－0.15 MPa后，调节蒸汽发生器，维持罐压和温度30 min，期间3-4 次打开排料口，维持每秒3-5 滴排料量，每次排料1-2 min，灭菌结束后关闭蒸汽发生器。罐压降至0.05 MPa 时，打开接种阀，使罐内的高温水通过排料口进入到料管及接种枪，杀菌10 min后关闭排料口阀门。将接种枪密封在装有75%酒精的自封袋内，保持其无菌状态，以备接种使用。
3、发酵罐液体培养基质的制作及灭菌
发酵罐内层加水至视镜底线，打开氧气呼吸器和罐顶气流控制阀，连接蒸汽器加热到30℃以上。然后按照发酵罐液体培养基质的配方称取原料，依次倒入发酵罐中，加入消泡剂搅拌均匀，盖上罐口。当培养液温度达到80℃时关闭氧气呼吸器，温度升至105℃时关闭罐顶气流控制阀。当压力达到 MPa，调节蒸汽发生器，使温度保持为121℃，维持60 min。
文章来源：《船舶标准化与质量》 网址: http://www.cbbzhyzl.cn/qikandaodu/2021/0211/660.html
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